Warning: Declaration of action_plugin_captcha::register(&$controller) should be compatible with DokuWiki_Action_Plugin::register(Doku_Event_Handler $controller) in /var/www/fs3/43/helixryf/public_html/tenttiwiki/lib/plugins/captcha/action.php on line 0

Warning: Cannot modify header information - headers already sent by (output started at /var/www/fs3/43/helixryf/public_html/tenttiwiki/lib/plugins/captcha/action.php:0) in /var/www/fs3/43/helixryf/public_html/tenttiwiki/inc/auth.php on line 549

Warning: Cannot modify header information - headers already sent by (output started at /var/www/fs3/43/helixryf/public_html/tenttiwiki/lib/plugins/captcha/action.php:0) in /var/www/fs3/43/helixryf/public_html/tenttiwiki/inc/actions.php on line 207
immunonkemiallisen_koetekniikan_kurssi - Tenttiwiki
Tenttiwiki

Immunokemiallisen koetekniikan kurssi

21.2.2005

1. Buffy coatista eristettiin PBMC-fraktio (veren mononukleaariset solut) Ficoll-gradienttisentrifugaatiolla. Tämän jälkeen solujen annettiin tarttua nylonvillapylvääseen ja pylvästä eluoitiin 10 ml:lla kasvatusmediumia. Osa soluista jatkopuhdistettiin MACS Pan T Cell Isolation Kit II:lla valmistajan ohjeen mukaan. Molemmille solupopulaatioille (ennen ja jälkeen MACS-puhdistuksen) suoritettiin suora kaksoisvärjäys (Fc-reseptorin blokkauksen jälkeen). Käytetyt vasta-aineet olivat anti-CD3-FITC ja anti-CD8-PE. Värjätyt solut analysoitiin virtaussytomtrillä. Tuloksia analysoitaessa saatiin (mm.) alla olevat dot plot -kuvaajat FL-1 vs. FL-2, joissa FL-1 on FITC-kanava ja FL-2 PE-kanava. Tulkitse analyysin tulos. Miten arvioit T-solujen puhdistumisen onnistuneen? Miten selität nelikentän UL-ruudun tapahtumat?

2. Jurkat E6-1 -solukloonin soluja aktivoitiin +37'C:ssa eri aikoja OKT-3 -vasta-aineella (anti-CD3) seuraavasti:

näyte 1 ei OKT-3 immunopresipitaatiokontrolli
näyte 2 ei OKT-3 aktivaatio 0'
näyte 3 OKT-3, 2 min aktivaatio 2'
näyte 4 OKT-3, 5 min aktivaatio 5'

Aktivoinnin jälkeen solut lyysattiin ja myös lysaatista otettiin näyte (näyte L). Näytteille 2-4 tehtiin tehtiin immunopresipitaatio käyttäen anti-PLC -vasta-ainetta (PLC = fosfolipaasi C-gamma, MP 160 000). Näyte 1 toimi IP-kontrollina jolle suoritettiin immunopresipitaatio ilman anti-PLC -vasta-ainetta. Kaikista näytteistä ajettiin SDS-PAGE ja proteiinit siirrettiin nitroselluloosakalvolle. Näytteet detektoitiin seuraavasti:

Blotti A näyte L solulysaatti, anti-PLC -blottaus
näyte 1 anti-fosfotyrosiini -blottaus
näyte 2 -“-
näyte 3 -”-
näyte 4 -“-
Blotti B näyte 1 anti-PLC -blottaus (samasta filtteristä P-Tyr vasta-aineen irrotuksen jälkeen
näyte 2 -”-
näyte 3 -“-
näyte 4 -”-

Tulkitse tulokset.